January 25, 2022

Microstrutture della matrice extracellulare del seno umano e colture 3D di idrogel proteico di cellule epiteliali mammarie

La matrice extracellulare tissutale (ECM) è un microambiente strutturalmente e compositivamente unico all’interno del quale le cellule native possono svolgere le loro attività biologiche naturali. Le cellule cresciute su substrati artificiali differiscono biologicamente e fenotipicamente da quelle cresciute all’interno del loro microambiente tissutale nativo.

Mancano studi che esaminino le strutture ECM dei tessuti umani e la biologia delle cellule dei tessuti umani nella loro corrispondente ECM tissutale. Tali indagini miglioreranno la nostra comprensione delle condizioni fisiopatologiche umane per una migliore assistenza clinica.

Riportiamo qui le caratteristiche strutturali del tessuto mammario normale umano e del tessuto carcinoma duttale invasivo ECM. Per la prima volta, un idrogel è stato fabbricato con successo utilizzando estratti proteici interi di ECM mammario normale umano. Utilizzando la colorazione dell’immunofluorescenza del collagene di tipo I (Col I) e l’apprendimento automatico dei suoi modelli fibrosi nell’idrogel ECM del seno umano polimerizzato, abbiamo definito le caratteristiche microstrutturali dell’idrogel e confrontato le microstrutture con quelle di altri idrogel ECM nativi.

È importante sottolineare che l’idrogel ECM ha supportato la crescita 3D e l’interazione cellula-ECM di cellule epiteliali mammarie normali e cancerose. Questo lavoro rappresenta un ulteriore avanzamento verso la piena ricostituzione del microambiente del tessuto mammario umano, un risultato che accelererà l’uso di matrici derivate da tessuto patofisiologico umano per la ricerca biomedica individualizzata e lo sviluppo terapeutico.

Esplorazione dell’attività dei derivati dell’imidazolo portatori di benzenesulfonamide nel cancro al seno triplo negativo e nel melanoma in colture cellulari 2D e 3D

I composti eterociclici sono uno dei principali gruppi di composti organici che possiedono una vasta gamma di applicazioni in vari settori della scienza e i loro derivati sono presenti in molte strutture bioattive. Mostrano un’ampia varietà di attività biologiche. Recentemente, sempre più attenzione è stata focalizzata su tali composti eterociclici come gli azoli. In questo lavoro, abbiamo sintetizzato una serie di nuovi derivati imidazolici che incorporano una porzione benzensulfonamide nella loro struttura, che sono stati poi valutati per la loro citotossicità contro il carcinoma mammario umano triplo negativo MDA-MB-231 e le linee cellulari di melanoma maligno umano IGR39 mediante test MTT .

Derivati imidazolici contenenti benzenesulfonamide contenenti 4-cloro e 3,4-diclorosostituenti nell’anello benzenico e gruppi 2-etiltio e 3-etil nell’anello imidazolico sono stati determinati come i composti più attivi. La concentrazione massima efficace dimezzata (EC 50 ) della maggior parte dei composti citotossici era 27,8 ± 2,8 contro M contro la linea cellulare IGR39 e 20,5 ± 3,6 contro M contro la linea cellulare MDA-MB-231. I composti hanno ridotto la formazione di colonie cellulari di entrambe le linee cellulari e hanno inibito la crescita e la vitalità degli sferoidi delle cellule IGR39 in modo più efficiente rispetto agli sferoidi del cancro al seno triplo negativo.

La proliferazione e la differenziazione delle cellule Caco-2 intestinali vengono mantenute in coltura con lisato piastrinico umano invece del siero fetale di vitello

Le linee cellulari sono ampiamente utilizzate come sistemi modello in vitro e sostituiscono gli esperimenti sugli animali. Si ritiene che la linea cellulare Caco-2 frequentemente utilizzata rifletta le caratteristiche dell’epitelio intestinale differenziato. Tuttavia, la necessità di coltivare le cellule con siero fetale di vitello (FCS) induce un’elevata variabilità, rischio di contaminazione ed è eticamente controversa. Abbiamo testato la coltura di cellule Caco-2 con lisato piastrinico umano (PL) invece di FCS.

Abbiamo confrontato la vitalità e la differenziazione cellulare misurando i livelli di ATP, l’espressione genica e proteica di marcatori specifici in estratti cellulari totali, vescicole di membrana a bordo spazzola (BBM) e zattere lipidiche (LR). La vitalità cellulare è stata leggermente migliorata nelle cellule cresciute con PL rispetto a FCS. Le cellule si sono differenziate in un fenotipo intestinale come le cellule coltivate in FCS, come indicato dai livelli di espressione genica simili dell’esoso e delle proteine di trasporto delle proteine e della proteina strutturale VILLIN .

BBM ha mostrato una distribuzione comparabile delle idrolasi intestinali, indicando una polarità della membrana cellulare mantenuta. Anche la distribuzione del marcatore proteico FLOTILLIN-2 in LR era simile. Concludiamo che PL è un sostituto squisito e adatto per FCS nella coltura di cellule Caco-2 che può eliminare molti svantaggi sostenuti a causa dell’uso di FCS.

Sistemi di coltura cellulare 3D: applicazione del tumore, vantaggi e svantaggi

Il tradizionale sistema di coltura cellulare in vitro bidimensionale (2D) (su un supporto piatto) è stato a lungo utilizzato nella ricerca sul cancro. Tuttavia, questo sistema non può essere completamente tradotto in studi clinici per rappresentare idealmente condizioni fisiologiche. Questa coltura non può imitare il microambiente tumorale naturale a causa della mancanza di comunicazione cellulare (cellula-cellula) e di interazione (cellula-cellula e cellula-matrice).

Per superare queste limitazioni, i sistemi di coltura tridimensionali (3D) sono sempre più sviluppati nella ricerca e sono diventati essenziali per la ricerca sui tumori, l’ingegneria dei tessuti e la ricerca biologica di base. La cultura 3D ha ricevuto molta attenzione nel campo della biomedicina grazie alla sua capacità di imitare la struttura e la funzione dei tessuti. La matrice 3D presenta una struttura altamente dinamica in cui i suoi componenti vengono depositati, degradati o modificati per delineare funzioni e fornire una piattaforma in cui le cellule si attaccano per svolgere le loro funzioni specifiche, tra cui adesione, proliferazione, comunicazione e apoptosi.

Finora, vari tipi di modelli appartengono a questa cultura: o la coltura basata su matrici aderenti naturali o sintetiche utilizzate per progettare scaffold 3D come biomateriali per formare una matrice 3D o basata su matrici non aderenti e/o matrici libere per formare il sferoidi. In questa recensione, riassumiamo innanzitutto un confronto tra culture 2D e 3D. Quindi, ci concentriamo sui diversi componenti della matrice extracellulare naturale che possono essere utilizzati come supporti nella cultura 3D.

Quindi dettagliamo diversi tipi di supporti naturali come matrigel, idrogel, supporti rigidi e diverse strategie sintetiche di matrici 3D come liofilizzazione, elettrospiding, stereolitografia, microfluido citando i vantaggi e gli svantaggi di ciascuno di essi. Infine, riassumiamo i diversi metodi di generazione di sferoidi normali e tumorali, citando i rispettivi vantaggi e svantaggi al fine di ottenere un modello 3D ideale (matrice) che mantenga le seguenti caratteristiche: migliore biocompatibilità, buone proprietà meccaniche corrispondenti al tessuto tumorale, degradabilità , microstruttura controllabile e componenti chimici come il tessuto tumorale, scambio di nutrienti favorevole e facile separazione delle cellule dalla matrice.

 

Ethanolamine, Cell Culture tested

CA071-010 GenDepot 100ml 97 EUR

Cell Culture Grade Water, Cell Culture Tested, Sterile

CCM1081-500 Bio Basic 500 mL 61.24 EUR

Cell Culture Grade Water, Cell Culture Tested, Sterile

CCM2081-1000 Bio Basic 1000 mL 68.87 EUR

UltraPure Water, Cell Culture Tested

W9200-045 GenDepot 450ml 80 EUR

Gelatin Solution , 0.1%, Cell culture tested

CA087-100 GenDepot 1L 97 EUR

Tranfferrin, Human Recombinant, Cell culture tested

T4600-100 GenDepot 100mg 253 EUR

Tranfferrin, Human Recombinant, Cell culture tested

T4600-101 GenDepot 1g 1022 EUR

Tranfferrin, Human Recombinant, Cell culture tested

T4600-110 GenDepot 10g 7880 EUR

Pluronic® F-127 *Cell culture tested *

20050 AAT Bioquest 10 g 115 EUR

Dimethyl Sulfoxide, Cell culture tested, >99.7% , 0.2um filtered

D2680-001 GenDepot 10ml 84 EUR

Dimethyl Sulfoxide, Cell culture tested, >99.7% , 0.2um filtered

D2680-002 GenDepot 25ml 111 EUR

Dimethyl Sulfoxide, Cell culture tested, >99.7% , 0.2um filtered

D2680-010 GenDepot 100ml 205 EUR

Pluronic F-68, 10% Sol, Cell Culture tested

CA072-010 GenDepot 100ml 88 EUR

Insulin, Human Recombinant, Cell culture tested, from E.coli

I4500-025 GenDepot 25mg 435 EUR

Insulin, Human Recombinant, Cell culture tested, from E.coli

I4500-101 GenDepot 1g 4505 EUR

Insulin, Human Recombinant, Cell culture tested, from E.coli

I4500-250 GenDepot 250mg 1022 EUR

Insulin, Human Recombinant, Cell culture tested, from Yeast

I4600-001 GenDepot 1g 469 EUR

Insulin, Human Recombinant, Cell culture tested, from Yeast

I4600-005 GenDepot 5g 1873 EUR

Insulin, Human Recombinant, Cell culture tested, from Yeast

I4600-010 GenDepot 10g 3425 EUR

Human Serum Albumin (HSA), Cell Culture Tested, Recombinant from plant

CA069-005 GenDepot 5g 489 EUR

Human Serum Albumin (HSA), Cell Culture Tested, Recombinant from plant

CA069-010 GenDepot 10g 968 EUR

Poly-D-Lysine Solution in PBS, 0.01%, Cell culture tested

CA084-010 GenDepot 100ml 138 EUR

CytoSelect 24-Well Cell Co-Culture System

CBA-160 Cell Biolabs 24 assays 438 EUR

CytoSelect 24-Well Cell Co-Culture System

CBA-160-5 Cell Biolabs 5 x 24 assays 1732 EUR

Baby Rabbit Complement serum, Cell culture grade (Lyophilized), tested for complement activity

COMPBR-1 Alpha Diagnostics 1 ml 164 EUR

Baby Rabbit Complement serum, Cell culture grade (Lyophilized), tested for complement activity

COMPBR-C-10 Alpha Diagnostics 10 ml 651 EUR

Agar, Plant Tissue Culture Tested , Type I , Derived from Gracilaria.

A2008-050 GenDepot 500g 205 EUR

Agar, Plant Tissue Culture Tested , Type I , Derived from Gracilaria.

A2008-100 GenDepot 1Kg 309 EUR

 

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