La DNA polimerasi termostabile dal metagenoma virale è un potente enzima RT-PCR

Le librerie metagenomiche virali sono una fonte promettente ma precedentemente non sfruttata di nuovi enzimi reagenti.

1.  Il sequenziamento profondo e lo screening funzionale del DNA metagenomico virale da un pool termale quasi bollente hanno identificato i cloni che esprimono l’attività della DNA polimerasi termostabile (Pol).
2. Tra questi, 3173 Pol ha mostrato sia un’elevata termostabilità che un’attività innata della trascrittasi inversa (RT). Descriviamo la biochimica di 3173 Pol e ne descriviamo l’uso nella PCR a trascrizione inversa a singolo enzima (RT-PCR). 3173 Pol di tipo selvaggio contiene un dominio correttore di esonucleasi 3′-5′ che fornisce un’elevata precisione nella PCR. Un derivato carente di esonucleasi più facile da usare è stato incorporato in a
3. Master mix PyroScript RT-PCR    e confronto con sistemi RT-PCR monoenzimatici (Tth) e a doppio enzima (MMLV RT /  Taq  ) per la determinazione quantitativa  dell’RNA target MS2, dell’RNA A dell’influenza e dell’mRNA. La specificità e la sensibilità della RT-PCR basata su 3173 Pol erano superiori alla Tth Pol e paragonabili ai tre comuni sistemi a doppio enzima. L’efficienza e la configurazione semplificata rendono questo enzima una potenziale alternativa alla ricerca molecolare e alla diagnostica.

Ottimizzazione del metodo di amplificazione isotermica per il rilevamento e la visualizzazione di Mycobacterium tuberculosis per il lavoro sul campo.