by Caratteristiche delle proteine di membrana e degli eritrociti citosolici.Al fine di testare un’ampia coorte di campioni di eritrociti in un contesto clinico, questa sezione descrive in dettaglio un nuovo approccio che consente l’analisi sia del citosolico umano che dei subproteomi di membrana. Nonostante la sua struttura semplice, l’alto contenuto di emoglobina presente nei globuli rossi (RBC) rende estremamente difficile l’analisi del proteoma.
- Sono state studiate a fondo varie strategie per isolare la membrana e le frazioni citosoliche dagli eritrociti e il loro effetto sul profilo del proteoma mediante 2-DE, con particolare attenzione alla rimozione dell’emoglobina.
- Di conseguenza, qui viene mostrato un approccio semplice, veloce e soddisfacente all’esaurimento dell’emoglobina nelle cellule eritrocitarie basato sul reagente HemogloBind per un’analisi soddisfacente del sub-proteoma citosolico con 2-DE senza grandi interferenze.
- Per il proteoma di membrana, è stata descritta una nuova strategia combinata basata sull’isolamento mediante lisi ipotonica e ulteriore purificazione in minicolonne, che consente il rilevamento di proteine ad alto peso molecolare (cioè spettrina, ankyrin) e pattern 2-DE ben separati. L’analisi della frazione di membrana mediante il metodo nano-LC accoppiato con lo spettrometro di massa LTQ-Orbitrap consente l’identificazione di un totale di 188 proteine uniche.
Quantificazione relativa della superossido dismutasi Cu-Zn glicata negli eritrociti mediante spettrometria di massa a ionizzazione elettrospray.
- La spettrometria di massa a ionizzazione elettrospray (ESIMS) è stata utilizzata per quantificare la superossido dismutasi Cu-Zn glicata (SOD-1) negli eritrociti umani. I campioni di SOD-1 sono stati preparati dai globuli rossi rimuovendo l’emoglobina utilizzando un gel di emoglobina seguita dall’estrazione con etanolo e cloroformio.
- La riproducibilità della misurazione della percentuale relativa di proteina glicata era buona e la deviazione standard di ciascuna misurazione era del 4,0%. Sulla base dell’analisi dello spettro di massa di una miscela di SOD-1 commerciale e SOD-1 parzialmente glicata in vitro in diversi rapporti, è stato riscontrato che la SOD-1 libera e glicata aveva la stessa efficienza di ionizzazione.
- La percentuale di glicazione su SOD-1 è stata misurata in 30 persone, compresi i pazienti diabetici. I livelli di glicazione variavano dal 4,5% al di sotto del limite di rilevamento.
- Il campione SOD-1 estratto dagli eritrociti è stato frazionato mediante cromatografia Glyco-Gel B e le frazioni separate sono state analizzate mediante MS. Gli spettri di massa della frazione assorbita hanno mostrato quantità significative di legame non specifico di proteine non glicate al Glyco-Gel B.
Intervalli di dosaggio e monitoraggio dell’emoglobina in pazienti con malattia renale cronica anemica trattati con epoetina alfa o darbepoetina alfa: uno studio di coorte retrospettivo.
- L’anemia è una complicanza comune della malattia renale cronica (CKD). L’intervallo di somministrazione approvato per gli stimolanti dell’eritropoiesi (ESA) attualmente disponibili è da 2 a 3 volte a settimana per l’epoetina alfa (EPO) e ogni 1 o 2 settimane per darbepoetina alfa (DARB). Tuttavia, per comodità, i medici a volte usano dosaggi meno frequenti.
- Questo studio ha studiato gli effettivi modelli di utilizzo dell’ESA (dosi e intervallo di somministrazione) e il controllo dell’emoglobina (Hb) in pazienti ambulatoriali adulti con insufficienza renale cronica che non richiedono dialisi presso la clinica per l’anemia della Cleveland Clinic Foundation. È stata anche studiata la distribuzione e la variabilità dei livelli di Hb in questi pazienti.
- Le cartelle cliniche e le registrazioni elettroniche di pazienti adulti con insufficienza renale cronica che hanno iniziato la terapia con ESA prima di marzo 2005 sono state riviste per determinare gli intervalli di dose iniziale, dominante (consecutivo più lungo) e finale e le dosi settimanali medie di EPO e DARB. Il controllo Hb è stato testato per le variazioni massime> 12 g / dL e <11 g / dL e la proporzione di misurazioni al di fuori di questi valori.
- L’analisi ha incluso i dati di 111 pazienti ambulatoriali (età media [DS] 65,9 [14,4] anni; 53,2% maschi; 66,7% bianchi, 29,7% neri, 2,7% altro 0,9% di etnia sconosciuta). Ventuno pazienti hanno ricevuto solo EPO, 74 solo DARB e 16 hanno sostituito ESA. Il follow-up medio è stato di 20,5 mesi. Le interruzioni iniziali della somministrazione più comuni sono state qwk per EPO (66,7%) e q2wk per DARB (90,5%). Gli intervalli di somministrazione dominanti erano ogni 2 settimane nel 61,9% dei pazienti con EPO e ogni 3 settimane nel 62,3% dei pazienti DARB. Tuttavia, l’80,0% di coloro che hanno ricevuto EPO q2wk e il 63,2% di coloro che hanno ricevuto DARB q3wk alla fine sono tornati agli intervalli di somministrazione iniziali. La percentuale più alta di misurazioni di Hb <11 g/dl si è verificata agli intervalli di dosaggio dominanti qwk per EPO e q2wk per DARB (entrambi 46,0%;
- I modelli di utilizzo dell’ESA in pazienti adulti ambulatoriali con malattia renale cronica presso questa struttura hanno indicato che i medici hanno esteso gli intervalli di somministrazione oltre quelli indicati nelle informazioni sulla prescrizione approvate. Tuttavia, durante la terapia di mantenimento somministrata a intervalli di dose estesi, si sono verificate differenze nei livelli di Hb, portando alla ripresa di intervalli di dose più brevi nella maggior parte dei pazienti.
Un’analisi comparativa dei fattori di rischio metabolico per la progressione della steatosi epatica non alcolica
La steatosi epatica non alcolica (NAFLD), la malattia epatica cronica dominante al mondo, copre lo spettro di malattie che vanno dalla steatosi lieve all’epatite grassa che causa fibrosi senza un consumo significativo di alcol. I principali fattori di rischio (RF) includono obesità, diabete di tipo 2 e dislipidemia. Attualmente, non esiste una gerarchia stabilita degli effetti delle RF metaboliche sulla progressione della NAFLD. In questo studio di coorte retrospettivo, sono stati esaminati e classificati gli effetti indipendenti e cumulativi dei tre principali RF sulla progressione della NAFLD.
652 pazienti NAFLD con ≥ 1 RF sono stati classificati in base alla RF combinata per studiare i cambiamenti annuali nella gravità della RF con la misurazione della rigidità epatica (LSM) nell’arco di cinque anni. Sono stati discussi l’indice di massa corporea (BMI), l’ emoglicina A1c (HbA1c ) , il colesterolo totale (TC) e l’LSM .
Nei pazienti con un singolo miglioramento della RF, le diminuzioni del BMI erano associate a una variazione annuale dell’LSM di -1,26 kPa, mentre le diminuzioni di HbA1c e TC erano associate a una variazione rispettivamente di -0,51 kPa e -0,56 kPa . Nei pazienti con un singolo peggioramento della RF, un aumento del BMI era correlato a una variazione dell’LSM di +0,74 kPa e aumenti di HbA1c e TC erano correlati a una variazione rispettivamente di +0,43 kPa e +0,16 kPa .
L’acetilcolina è un neurotrasmettitore essenziale che si trova in tutto il sistema nervoso.
- La sua azione sui recettori postsinaptici è regolata dall’idrolisi da parte di varie carbossilesterasi, in particolare colinesterasi (ChEs). La tossicità acuta dei composti organofosforici (OP) è direttamente correlata alla loro attività come inibitori del ChE. Un test ampiamente utilizzato per valutare l’attività ChE è il metodo spettrofotometrico sviluppato da Ellman et al. Quando la fonte dell’enzima è derivata dai tessuti o, in particolare, dal sangue, l’emoglobina mostra un picco spettrofotometrico alla stessa lunghezza d’onda utilizzata per l’analisi dell’attività colinergica.
- Ciò crea uno sfondo significativo che interferisce con il test di Ellman e deve essere superato per monitorare da vicino l’attività della colinesterasi. Qui confrontiamo direttamente i metodi di elaborazione del sangue: il metodo classico (1,67 ± 0,30 U / ml) e il metodo HemogloBind (1,51 ± 0,17 U / ml) e mostriamo chiaramente che il pretrattamento dei campioni di sangue con emoglobina è sia sufficiente che sufficiente. e un metodo rapido di preparazione del campione per la valutazione dell’attività ChE mediante il metodo Ellman.
Metodologia innovativa per l’analisi dei sottoproteomi di membrana e degli eritrociti citosolici mediante il metodo 2-DE.
- Al fine di testare un’ampia coorte di campioni di eritrociti in un contesto clinico, proponiamo un nuovo approccio che consente l’analisi sia del citosolico umano che dei subproteomi di membrana.
- Nonostante la sua struttura semplice, l’alto contenuto di emoglobina presente nei globuli rossi (RBC) rende estremamente difficile l’analisi del proteoma. Qui indaghiamo diverse strategie per isolare la membrana e le frazioni citosoliche dagli eritrociti e il loro effetto sulla profilazione del proteoma da parte di 2-DE, prestando particolare attenzione alla rimozione dell’emoglobina.
- Un approccio semplice, veloce e soddisfacente all’esaurimento dell’emoglobina basato sul reagente HemogloBind è stato applicato con successo alle cellule eritrocitarie, rendendo possibile l’analisi del sottoproteoma citosolico con 2-DE senza troppe interferenze.
- Per il proteoma di membrana, qui viene descritta una nuova strategia combinata basata sull’isolamento mediante lisi ipotonica e ulteriore purificazione su minicolonne, che consente il rilevamento di proteine ad alto peso molecolare (cioè spettrina, ankyrin) e modelli 2-DE ben separati.
Dissociation Reagent, 5ML |
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| X017-5ML | Arbor Assays | 5ML | 122 EUR |
Stop Solution, 5ML |
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| X020-5ML | Arbor Assays | 5ML | 65 EUR |
Dry DMSO, 5ML |
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| X022-5ML | Arbor Assays | 5ML | 122 EUR |
Borohydride Buffer, 5ML |
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| X027-5ML | Arbor Assays | 5ML | 122 EUR |
NADPH Diluent, 5ML |
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| X034-5ML | Arbor Assays | 5ML | 87 EUR |
Dissociation Reagent, 5ML |
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| X058-5ML | Arbor Assays | 5ML | 109 EUR |
Stop Solution, 5ML |
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| X134-5ML | Arbor Assays | 5ML | 65 EUR |
Hydrogen Peroxide Reagent, 5ML |
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| C115-5ML | Arbor Assays | 5ML | 123 EUR |
Fluorescent Detection Reagent, 5ML |
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| C116-5ML | Arbor Assays | 5ML | 268 EUR |
Hydrogen Peroxide Reagent, 5ML |
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| C132-5ML | Arbor Assays | 5 ML | 123 EUR |
Color Reagent A, 5ML |
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| X092-5ML | Arbor Assays | 5ML | 109 EUR |
Color Reagent B, 5ML |
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| X093-5ML | Arbor Assays | 5ML | 109 EUR |
DetectX® Formaldehyde Reagent, 5ML |
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| C002-5ML | Arbor Assays | 5ML | 478 EUR |
DetectX® RBP Conjugate, 5ML |
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| C010-5ML | Arbor Assays | 5ML | 237 EUR |
DetectX® Osteopontin Conjugate, 5ML |
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| C125-5ML | Arbor Assays | 5ML | 237 EUR |
DetectX® Prolactin Conjugate, 5ML |
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| C138-5ML | Arbor Assays | 5ML | 178 EUR |
DetectX® Insulin Conjugate, 5ML |
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| C186-5ML | Arbor Assays | 5ML | 268 EUR |
5ML SELF STANDING SCREW-CAP TUBE, |
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| ST-5ML | CORNING | 500/pk | 199 EUR |
DetectX® Cystatin C Conjugate, 5ML |
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| C034-5ML | Arbor Assays | 5ML | 237 EUR |
DetectX® Endothelin-1 Conjugated Antibody, 5ML |
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| C159-5ML | Arbor Assays | 5ML | 237 EUR |
5ML SELF STANDING SCREW-CAP TUBE WITH BLUE CAP, UNASSEMBLED |
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| SCT-5ML | CORNING | 500/pk | 118 EUR |
HemogloBind™ |
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| H0145-05 | Biotech Support Group | 5 mL | 359 EUR |
HemogloBind™ |
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| H0145-15 | Biotech Support Group | 15 mL | 709 EUR |
HemogloBind™ |
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| H0145-50 | Biotech Support Group | 50 mL | 1420 EUR |
SingleStep Poly-HRP Anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody, HRP-5ml |
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| Q2AB1-5ml | EnQuireBio | 5ml | 131 EUR |
SingleStep Poly-HRP Anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody, HRP-5ml |
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| Q2AB2-5ml | EnQuireBio | 5ml | 131 EUR |
5ML SELF STANDING SCREW-CAP TUBE WITH BLUE CAP, UNASSEMBLED, PRE-STERILIZED |
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| SCT-5ML-S | CORNING | 25/pk | 126 EUR |
HemogloBind™ Trial Kit |
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| HB145K-05 | Biotech Support Group | 420 EUR | |
HemogloBind™ Nucleic Acid |
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| HN250-20 | Biotech Support Group | 20 preps | 364 EUR |
HemogloBind™ Nucleic Acid |
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| HN250-200 | Biotech Support Group | 200 preps | 1014 EUR |
NuGel-HemogloBind™ (Hemoglobin Removal) Kit |
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| NP-HO-T25 | Biotech Support Group | 25 preps | 643 EUR |
NuGel-HemogloBind™ (Hemoglobin Removal) Kit |
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| NP-HO-T50 | Biotech Support Group | 50 preps | 1176 EUR |
HemogloBind™ Blood Card Reagent Kit |
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| H0145BC-10 | Biotech Support Group | 10 preps | 450 EUR |
HemogloBind™ Blood Card Reagent Kit |
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| H0145BC-50 | Biotech Support Group | 50 preps | 1623 EUR |
Tube Holder for 5ml tubes (2 x 5ml) |
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| D1036-A5 | Benchmark Scientific | 1 PC | 158.09 EUR |
5ml Tube holder |
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| D2400-R5 | Benchmark Scientific | 1 PC | 742.73 EUR |
5ml Pipette Tips |
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| P7700-T5M | Benchmark Scientific | 1 PC | 81.68 EUR |
COOLRACK XT 5ML HOLDS 12 X 5ML CENTRIFUGE TUBES |
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| 432060 | CORNING | 1/pk | 297 EUR |
Rabbit Complement UnadsoRabbited 5mL |
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| 31060-2 | Pel-Freez | 5mL | 83.49 EUR |
Rabbit Complement ADSORabbitED 5mL |
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| 31063-2 | Pel-Freez | 5mL | 119.38 EUR |
7077B PIPET SHRTY 5ML |
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| 7077B-5 | CORNING | 200/pk | 397 EUR |
7078B PIPET SHRTY 5ML |
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| 7078B-5 | CORNING | 200/pk | 380 EUR |
CORNING, SYRINGE TIPS, 5ML |
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| 6624 | CORNING | 1/pk | 77 EUR |
Fc Receptor Blocker, 5ml |
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| NB309-5S | Innovex | 5 ml | 188 EUR |
5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, sterile, ten bags of 20 tubes |
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| C2520 | MTC Bio | 200/pack | 80.38 EUR |
5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes |
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| C2500 | MTC Bio | 200/pack | 76.66 EUR |
1-5ML SINGLE CHANNEL PIPETTOR |
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| AP-5000 | CORNING | 1/pk | 200 EUR |
CORNING, SYRINGE TIPS, 5ML, STERILE |
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| 6632 | CORNING | 1/pk | 101 EUR |
Sterile 5mL Transport Tube (Axygen) |
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| TUBE5AX-S2 | Next Advance | 500box | 223 EUR |
Sterile 5mL Centrifuge Tube (Eppendorf) |
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| TUBE5EP-S | Next Advance | 200box | 155 EUR |
5mL MacroTube Starter Kit. Includes |
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| C2500-SK | MTC Bio | 1/pack | 183.65 EUR |
Block for 5ml centrifuge tubes |
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| H5000-5MT | Benchmark Scientific | 1 PC | 382.55 EUR |
5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, assorted colors |
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| C2500-AST | MTC Bio | 200/pack | 76.66 EUR |
5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, blue tinted |
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| C2500-B | MTC Bio | 200/pack | 76.66 EUR |
5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, green tinted |
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| C2500-G | MTC Bio | 200/pack | 76.66 EUR |
5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, red tinted |
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| C2500-R | MTC Bio | 200/pack | 76.66 EUR |
5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, yellow tinted |
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| C2500-Y | MTC Bio | 200/pack | 76.66 EUR |
Human Serum IgG Depl Pooled (5mL) |
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| 34021-5 | Pel-Freez | 5mL | 130.25 EUR |
7077 5 PIPET 5ML STERILE STERILE |
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| 7077-5N | CORNING | 120/pk | 248 EUR |
7078 5 PIPET 5ML STERILE STERILE |
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| 7078-5N | CORNING | 240/pk | 282 EUR |
7078D 5 PIPET 5ML STERILE STERILE |
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| 7078D-5 | CORNING | 25/pk | 217 EUR |
CENT TUBE,DISP,SCREW CAP,5ML |
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| 99502-5 | CORNING | 125/pk | 97 EUR |
5ML PIPET TIPS COMPATIBLE WITH GILSON |
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| T-5000-C | CORNING | 250/pk | 161 EUR |
Non-Sterile 5mL Transport Tube (Axygen) |
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| TUBE5AX | Next Advance | 1000box | 214 EUR |
Serological Pipettes, 5ml, 400 per case |
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| SP102116 | Bio Basic | 1CS, 400UNIT | 179.94 EUR |
Serological Pipettes, 5ml , Sterile, Individually Wrapped |
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| LC3063-200 | GenDepot | 200/pk | 111 EUR |
5mL Snap-Cap MacroTube, 5ml, non-sterile, 4 bags of 50 tubes, opaque black tint |
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| C2500-OB | MTC Bio | 200/pack | 76.66 EUR |
Human Comp IgG/IgM Depleted Pooled (5mL) |
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| 34010-5 | Pel-Freez | 5mL | 255.31 EUR |
Human Serum IgG/IgM Depl Pooled (5mL) |
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| 34014-5 | Pel-Freez | 5mL | 152 EUR |
CORNING® PURAMATRIX™ PEPTIDE HYDROGEL, 5ML |
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| 354250 | CORNING | 1/pk | 285 EUR |
PIPETTE,5ML,PS,S,BK,50BAG/500 |
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| 4050 | CORNING | 50/pk | 151 EUR |
5ml Tube, Dual Cap, Polypropylene, 100/Bag |
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| TD535 | Bio Basic | 1PK, 100UNIT | 56.09 EUR |
Tips, 5ml for Propette and Propette LE |
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| P4305 | MTC Bio | 250/pack | 82.4 EUR |
Human Lipoprotein (a) Calibrator 3 Protein |
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| abx060886-5ml | Abbexa | 5 ml | 342 EUR |
SDS-PAGE Sample Loading Buffer (2x) |
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| abx090647-5ml | Abbexa | 5 ml | 175 EUR |
SDS-PAGE Sample Loading Buffer (5x) |
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| abx090648-5ml | Abbexa | 5 ml | 189 EUR |
SDS-PAGE Sample Loading Buffer (6x) |
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| abx090649-5ml | Abbexa | 5 ml | 203 EUR |
Native Gel Sample Loading Buffer (2x) |
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| abx090650-5ml | Abbexa | 5 ml | 175 EUR |
Native Gel Sample Loading Buffer (5x) |
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| abx090651-5ml | Abbexa | 5 ml | 189 EUR |
Protein A Resin |
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| abx098111-5ml | Abbexa | 5 ml | 398 EUR |
Protein G Resin |
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| abx098112-5ml | Abbexa | 5 ml | 439 EUR |
6x Protein Loading Buffer |
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| abx098124-5ml | Abbexa | 5 ml | 189 EUR |
G418 |
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| abx098131-5ml | Abbexa | 5 ml | 217 EUR |
DNA Loading Buffer |
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| abx098143-5ml | Abbexa | 5 ml | 175 EUR |
Library Dilution Buffer |
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| abx098898-5ml | Abbexa | 5 ml | 258 EUR |
Synaptopodin (SYNPO) Antibody |
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| abx020657-5ml | Abbexa | 5 ml | 996 EUR |
Lamin (Mixed) Antibody |
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| abx020891-5ml | Abbexa | 5 ml | 592 EUR |
Lymphocytic Choriomeningitis Virus (LCMV) Antibody |
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| abx022049-5ml | Abbexa | 5 ml | 676 EUR |
Desmocollin 3 (DSC3) Antibody |
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| abx022465-5ml | Abbexa | 5 ml | 968 EUR |
MHC Class II I-Ab Antibody |
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| abx412635-5ml | Abbexa | 5 ml | 606 EUR |
Cytokeratin 18 / CK-18 (KRT18) Antibody |
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| abx413457-5ml | Abbexa | 5 ml | 606 EUR |
Epithelial Cell Adhesion Molecule (CD326) Antibody |
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| abx415574-5ml | Abbexa | 5 ml | 606 EUR |
C to C Lysis Buffer |
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| abx298007-5ml | Abbexa | 5 ml | 286 EUR |
CDM-XF Supplement |
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| abx298010-5ml | Abbexa | 5 ml | 286 EUR |
Eugenol |
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| GK9909-5ML | Glentham Life Sciences | 5 ml | 42 EUR |
Linolenic acid |
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| GL9596-5ML | Glentham Life Sciences | 5 ml | 54 EUR |
- Un’aliquota della frazione di membrana è stata anche digerita in soluzione e analizzata mediante nano-LC accoppiato a uno spettrometro di massa LTQ-Orbitrap. Con questo approccio, sono state identificate un totale di 188 proteine uniche. Questo studio costituisce la base per futuri studi clinici in cui potrebbero essere coinvolti i globuli rossi.