Luglio 3, 2022

Struttura e funzione dei telomeri

Mutazioni del promotore TERT altamente ricorrenti nel melanoma umano. Il sequenziamento sistematico dei genomi del cancro umano ha identificato molte mutazioni ricorrenti nelle regioni dei geni codificanti le proteine, ma raramente nelle regioni regolatorie dei geni. Qui descriviamo due mutazioni indipendenti nel   promotore della trascrittasi inversa  della telomerasi     (TERT), un gene che codifica per la subunità catalitica della    telomerasi  , che insieme si verificano in 50 melanomi su 70 (71%) testati.

Queste mutazioni generano motivi di legame di consenso de novo per i fattori di trascrizione E-twenty-sei (ETS) e nei test reporter le mutazioni hanno aumentato l’attività trascrizionale del promotore TERT da due a quattro volte. Uno studio su 150 linee cellulari tumorali derivate da diversi tipi di tumore ha rivelato le stesse mutazioni in 24 (16%) casi, con prove preliminari di un’aumentata incidenza di carcinoma vescicale ed epatocellulare nelle cellule. Pertanto, le mutazioni somatiche nelle regioni regolatrici del genoma possono costituire un importante meccanismo cancerogeno.

Mutazioni del promotore TERT nel melanoma familiare e sporadico.

  1. Il melanoma cutaneo si manifesta sia in forma familiare che sporadica. Abbiamo esaminato una famiglia suscettibile al melanoma attraverso l’analisi del collegamento e il sequenziamento ad alto rendimento e abbiamo identificato una mutazione della segregazione della malattia germinale nel promotore del   gene della trascrittasi inversa  della telomerasi      (TERT) che codifica per la     subunità catalitica della telomerasi .
  2. La mutazione crea un nuovo motivo di legame per i fattori di trascrizione Ets e i fattori del complesso ternario (TCF) vicino all’inizio della trascrizione e, nei saggi del gene reporter, ha persino portato a un duplice aumento della trascrizione.
  3. Abbiamo quindi testato il promotore TERT nel melanoma sporadico e osservato mutazioni somatiche ricorrenti della firma ultravioletta in 125 su 168 (74%) linee cellulari derivate da melanoma metastatico umano, 45 su 53 tessuti tumorali metastatici rilevanti (85%) e 25 su 77 ( 33%) melanomi primari. La maggior parte di queste mutazioni si è verificata in due posizioni nel promotore TERT e ha anche generato motivi di legame per i fattori di trascrizione Ets / TCF.
  4. Evoluzione della serratura per abbinare la chiave per creare una famiglia di recettori accoppiati a proteine ​​G, fortemente attivati ​​da un ligando neutro.

Abbiamo sviluppato recettori muscarinici nel lievito per generare una famiglia di recettori accoppiati a proteine ​​G (GPCR) che sono attivati ​​solo da un composto farmacologicamente inerte simile a un farmaco e biodisponibile (clozapina N-ossido). Lo screening successivo in linee cellulari umane ha facilitato la creazione di una famiglia di GPCR muscarinici di acetilcolina adatti per test in vitro e in situ. Abbiamo quindi costruito linee cellulari di muscoli lisci polmonari immortalate con telomerasi umana che   esprimono stabilmente tutti e cinque i membri della famiglia e abbiamo scoperto che ciascuna ricapitolava fedelmente il fenotipo di segnalazione del recettore dello stelo.

Abbiamo anche espresso il progettista del recettore accoppiato a G (i) nei neuroni dell’ippocampo (hM (4) D) e abbiamo dimostrato la sua capacità di indurre l’iperpolarizzazione della membrana e il silenziamento neuronale. Pertanto, abbiamo sviluppato un approccio semplice alla progettazione di famiglie GPCR con specificità del ligando modificata. Tali   GPCR  retroingegnerizzati si riveleranno potenti strumenti per modulare selettivamente le vie di trasduzione del segnale in vitro e in vivo.

Le mutazioni del promotore TERT sono comuni nei gliomi e in un sottoinsieme di tumori derivati ​​da cellule con un basso tasso di auto-rinnovamento.

  • Le cellule maligne, come tutte le cellule in crescita attiva, hanno bisogno di mantenere i loro telomeri, ma solo di recente sono stati scoperti i meccanismi genetici responsabili del mantenimento dei telomeri nei tumori. In particolare, è stato dimostrato che le mutazioni nei telomeri alfa talassemia che legano le proteine ​​/ Ritardo mentale legato all’X (ATRX) o la proteina associata al dominio della morte (DAXX) sono alla base del meccanismo di mantenimento dei telomeri senza   telomerasi    (estensione alternativa della telomerasi) e mutazioni puntiformi nel promotore, il  gene della    trascrittasi    inversa della telomerasi (TERT) aumenta l’espressione della    telomerasi    ed è stato dimostrato che si verifica nei melanomi e in un piccolo numero di altri tumori.
  • Per definire ulteriormente i tipi di tumori in cui quest’ultimo meccanismo gioca un ruolo, abbiamo esaminato 1230 tumori di 60 tipi diversi. Abbiamo scoperto che i tumori possono essere classificati in tassi di mutazione bassi (<15%) e alti (≥15%) del promotore TERT. Nove tipi di tumore con un livello elevato di TERT provengono quasi sempre da tessuti con un tasso di auto-rinnovamento relativamente basso, inclusi melanomi, liposarcomi, carcinomi epatocellulari, carcinomi uroteliali, carcinomi a cellule squamose della lingua, medulloblastomi e sottotipi di gliomi (incluso l’83% del glioblastoma primario , il tipo più comune di tumore al cervello).
  • Le mutazioni TERT e ATRX si escludevano a vicenda, suggerendo che questi due meccanismi genetici forniscono benefici equivalenti alla crescita selettiva. Oltre alle loro implicazioni per la comprensione della relazione tra telomeri e cancro, le mutazioni TERT forniscono un biomarcatore che può essere utile nella diagnosi precoce dei tumori del tratto urinario e del fegato e nella classificazione e prognosi dei tumori cerebrali.

La disfunzione dei telomeri provoca disturbi metabolici e mitocondriali.

  1. La disfunzione dei telomeri attiva l’arresto della crescita cellulare, l’invecchiamento e l’apoptosi mediati da p53, con conseguente atrofia progressiva e deterioramento della funzione nei tessuti ad alto turnover.
  2. I più ampi effetti avversi della disfunzione dei telomeri in molti tessuti, compresi i sistemi più dormienti, hanno spinto le analisi della rete trascrittomica a identificare i meccanismi comuni all’opera nelle cellule staminali ematopoietiche, nel cuore e nel fegato.
  3. Questi studi imparziali hanno rivelato una profonda repressione dei recettori attivati ​​dal proliferatore gamma del perossisoma, dei coattivatori alfa e beta (PGC-1α e PGC-1β, noti anche come Ppargc1a e Ppargc1b, rispettivamente) e topi downlink nella   trascrittasi inversa della telomerasi   nulla    (Tert) o geni la componente RNA della   telomerasi    (Terc).
  4. Coerentemente con i PGC come regolatori primari della fisiologia e del metabolismo mitocondriali, la disfunzione dei telomeri è associata a biogenesi e funzione mitocondriale compromesse, ridotta gluconeogenesi, cardiomiopatia e aumento delle specie reattive dell’ossigeno.
  5. In una situazione di disfunzione dei telomeri, l’espressione forzata di Tert o PGC-1α o la delezione di p53 nella linea germinale (nota anche come Trp53) ripristina sostanzialmente l’espressione della rete PGC, la respirazione mitocondriale, la funzione cardiaca e la gluconeogenesi.
  6. Mostriamo che la disfunzione dei telomeri attiva p53, che a sua volta si lega e sopprime i promotori PGC-1α e PGC-1β, stabilendo così un legame diretto tra il telomero e la biologia mitocondriale.
Il DNA dei telomeri – i complessi cromosomici terminali DNA-proteina – differisce notevolmente da altre sequenze di DNA sia nella struttura che nella funzione. Un lavoro recente ha evidenziato la sua insolita sintesi da parte della ribonucleoproteina      trascrittasi    inversa , telomerasi   e la sua capacità di formare strutture insolite in vitro. Inoltre, è stato dimostrato che la sintesi dei telomeri da parte della    telomerasi    è essenziale per il mantenimento dei telomeri e la vitalità a lungo termine.

 Omologhi catalitici di   subunità telomerasi da lievito diviso e umano.

  • Le subunità proteiche catalitiche della    telomerasi    dai ciliati di Euplotes aediculatus e lievito Saccharomyces cerevisiae contengono      motivi di trascrittasi inversa . Qui vengono identificati i geni omologhi per Schizosaccharomyces pombe e lievito di scissione umano.
  • L’interruzione del gene S. pombe ha provocato l’accorciamento e l’invecchiamento dei telomeri e l’espressione di mRNA dal gene umano è stata correlata   all’attività della telomerasi  nelle linee cellulari. Il confronto di sequenza ha collocato le    proteine ​​della telomerasi nella   famiglia della trascrittasi inversa    , ma ha rivelato caratteristiche che le distinguono dai loro parenti retrovirus e retrotrasposoni.

Telomerase reverse transcriptase Antibody (HRP)

20-abx108799 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx110254 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx103374 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx103375 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx103376 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx002167 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

abx027802-400ul Abbexa 400 ul 523 EUR

Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

abx027802-80l Abbexa 80 µl 286 EUR

Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

abx027803-400ul Abbexa 400 ul 523 EUR

Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

abx027803-80l Abbexa 80 µl 286 EUR

Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

abx016155-100ug Abbexa 100 ug 411 EUR

Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

abx433353-200ul Abbexa 200 ul 384 EUR

Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx300609 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx323591 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

abx224167-100ug Abbexa 100 ug 411 EUR

Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx339525 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

abx146885-100ug Abbexa 100 ug 439 EUR

Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx174734 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx174735 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx211395 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx211411 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx211412 Abbexa
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Telomerase reverse transcriptase Polyclonal Antibody

42529-100ul SAB 100ul 333 EUR

Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx324319 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody

20-abx324977 Abbexa
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Telomerase reverse transcriptase Conjugated Antibody

C49336 SAB 100ul 397 EUR

Human Telomerase reverse transcriptase (TERT)

1-CSB-EP023391HU Cusabio
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Mouse Telomerase reverse transcriptase (Tert)

1-CSB-EP023391MO Cusabio
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Recombinant Telomerase Reverse Transcriptase (TERT)

4-RPC241Hu01 Cloud-Clone
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Recombinant Telomerase Reverse Transcriptase (TERT)

4-RPC241Mu01 Cloud-Clone
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Recombinant Telomerase Reverse Transcriptase (TERT)

4-RPC241Ra01 Cloud-Clone
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Polyclonal Antibody (Human), APC-Cy7

4-PAC241Hu01-APC-Cy7 Cloud-Clone
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4-PAC241Mu01-APC-Cy7 Cloud-Clone
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4-PAC241Ra01-APC-Cy7 Cloud-Clone
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Human Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Protein

20-abx069251 Abbexa
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Mouse Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Protein

20-abx069252 Abbexa
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Rat Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Protein

20-abx069253 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody (HRP)

20-abx300610 Abbexa
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Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Antibody (Biotin)

20-abx300612 Abbexa
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Telomerase reverse transcriptase Polyclonal Conjugated Antibody

C42529 SAB 100ul 397 EUR

Pig Telomerase Reverse Transcriptase ELISA kit

E07T0601-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Pig Telomerase Reverse Transcriptase ELISA kit

E07T0601-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Pig Telomerase Reverse Transcriptase ELISA kit

E07T0601-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

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E02T0601-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Rat Telomerase Reverse Transcriptase ELISA kit

E02T0601-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

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E09T0601-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

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E09T0601-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Human Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ELISA Kit

20-abx153255 Abbexa
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Cow Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ELISA Kit

abx519511-96tests Abbexa 96 tests 911 EUR

Dog Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ELISA Kit

abx519512-96tests Abbexa 96 tests 911 EUR

Rat Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ELISA Kit

abx575325-96tests Abbexa 96 tests 668 EUR

Human Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) CLIA Kit

20-abx493564 Abbexa
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Rat Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) CLIA Kit

20-abx493565 Abbexa
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Dog TERT/ Telomerase reverse transcriptase ELISA Kit

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Bovine TERT/ Telomerase reverse transcriptase ELISA Kit

E0261Bo Sunlong 1 Kit 717 EUR

Mouse Tert/ Telomerase reverse transcriptase ELISA Kit

E1452Mo Sunlong 1 Kit 571 EUR

Human TERT/ Telomerase reverse transcriptase ELISA Kit

E2468Hu Sunlong 1 Kit 571 EUR

Human Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ELISA Kit

abx251454-96tests Abbexa 96 tests 668 EUR

Mouse Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ELISA Kit

abx255078-96tests Abbexa 96 tests 668 EUR

Pig Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ELISA Kit

abx360598-96tests Abbexa 96 tests 825 EUR

Rabbit Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ELISA Kit

abx363632-96tests Abbexa 96 tests 825 EUR

Sheep Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ELISA Kit

abx364440-96tests Abbexa 96 tests 926 EUR

Chicken Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ELISA Kit

abx355721-96tests Abbexa 96 tests 825 EUR

Monkey Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) ELISA Kit

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  • Pertanto, le   subunità catalitiche della telomerasi proposte  sono filogeneticamente conservate e rappresentano un ramo profondo nell’evoluzione delle       trascrittasi inverse .

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