La perdita del fattore H del complemento nelle cellule dell’RPE causa la degenerazione della retina in un modello di co-coltura di espianto di retina suina e RPE umano

La degenerazione maculare legata all’età (AMD) è una malattia degenerativa della macula che colpisce la popolazione anziana. Le opzioni di trattamento sono limitate, in parte a causa della mancanza di comprensione della patologia AMD e della mancanza di modelli di ricerca adeguati che replichino la complessità della macula umana e l’intricata interazione dei fattori di rischio genetici, dell’invecchiamento e dello stile di vita che contribuiscono all’AMD. Uno dei principali rischi genetici associati all’AMD è localizzato sul gene del Complement Factor H ( CFH ), che porta a una sostituzione dell’amminoacido nella proteina Factor H (FH) (Y402H).

Tuttavia, il meccanismo di come questa variante FH promuove l’insorgenza di AMD rimane poco chiaro. In precedenza, abbiamo dimostrato che la deprivazione di FH nelle cellule RPE, tramite il silenziamento CFH , porta a un aumento dell’infiammazione, al deterioramento metabolico e alla vulnerabilità allo stress ossidativo. In questo studio, abbiamo stabilito un nuovo modello di co-coltura comprendente CFH cellule RPE silenziate e spiegazioni della retina suina derivate dalla striscia visiva degli occhi suini, che assomigliano molto alla macula umana.

Mostriamo che le retine esposte a cellule RPE prive di FH mostrano segni di degenerazione retinica, con i bastoncelli che sono le prime cellule a subire la degenerazione. Inoltre, tramite analisi Raman, abbiamo osservato cambiamenti che coinvolgono i mitocondri e la composizione lipidica delle retine co-coltivate dopo la perdita di FH. È interessante notare che gli effetti dannosi della perdita di FH nelle cellule RPE sulla neuroretina erano indipendenti dall’attivazione delle cellule gliali e dalle fonti esterne di complemento.

Inoltre, dimostriamo che il modello di co-coltura è adatto anche per espianti di retina umana e abbiamo osservato una tendenza simile quando le cellule RPE private di FH sono state co-coltivate con espianti di retina umana da un singolo occhio del donatore. I nostri risultati evidenziano l’importanza dell’FH derivato da RPE per l’omeostasi retinica e forniscono un modello prezioso per la ricerca sull’AMD.

Approcci neurochirurgici alla raccolta del tessuto cerebrale per l’istituzione di colture cellulari in modelli cellulari sperimentali neurali

Un confronto tra strisci di sangue periferico, colture cellulari autologhe e ibridazione di macchie di linee inverse nello screening per Anaplasma / Ehrlichia in cani vaganti e cani sintomatici a Trinidad

Questo studio ha confrontato due metodi per rilevare casi di ehrlichiosi canina in un ambiente di campo. Un metodo era una reazione a catena della polimerasi per il gene dell’rRNA 16S seguita da un’ibridazione inversa di blot con generi e sonde specie-specifiche per Anaplasma/Ehrlichia . Il secondo metodo era una coltura cellulare autologa di leucociti periferici isolati da sangue eparinizzato e mantenuti in un siero canino omologo in terreno modificato Eagle di Dulbecco senza antibiotici. Le colture sono state esaminate al microscopio ottico per i corpi inclusi dopo 48 ore.

I leucociti sono stati propagati con successo per 20 dei 34 campioni inviati per la coltura cellulare autologa. I corpi di inclusione sono stati osservati dopo la coltura cellulare nei leucociti di otto cani. Due cani sono risultati positivi alla sonda dei generi Anaplasma / Ehrlichia e sei cani sono risultati positivi alla E. canis dopo l’ibridazione con reverse line blot. C’era un accordo accettabile tra l’ibridazione con blot della linea inversa e i risultati della coltura cellulare. Per rilevare E. canis nei casi subclinici e clinici di malattia. Una diagnosi definitiva di E. canis è ottenuto al meglio da una combinazione di segni clinici, coltura cellulare autologa positiva e risultati dell’ibridazione con blot inverso.

Colture primarie di spigola contro la linea cellulare RTgill-W1: influenza del modello cellulare sulla sensibilità alle nanoparticelle

La determinazione della tossicità acuta per i vertebrati negli ambienti acquatici viene eseguita principalmente seguendo la linea guida 203 per i test dell’OCSE, che richiede l’uso di un gran numero di pesci e con la mortalità come endpoint. Questo test viene utilizzato anche per determinare la tossicità dei nanomateriali negli ambienti acquatici. Poiché è auspicabile un metodo sostitutivo per i test sugli animali negli studi di nanotossicità, qui viene esaminata la fattibilità di colture primarie di pesce o linee cellulari come modello per gli screening di nanotossicità. Dicentrarchus labrax colture primarie e linee cellulari RTgill-W1 sono stati esposti a diverse concentrazioni (0,1 ei 200 ug / mL) di differenti nanoparticelle (TiO ₂ , polistirene e argento), e la citotossicità, metaboliche l’attività e la formazione di specie reattive dell’ossigeno sono state studiate dopo 24 e 48 ore di esposizione.

La corona proteica come quantità di proteine legate, nonché l’influenza della modifica della superficie (-COOH, -NH ₂ ), mezzi di esposizione (L15 di Leibovitz o acqua di mare), agenti atmosferici e tipo di cellula erano le variabili sperimentali incluse per testare la loro influenza sui risultati delle analisi. I dati di tutti gli scenari sono stati suddivisi in base alla significatività di ciascuna variabile sperimentale nel risultato dei test di citotossicità, in un approccio esplorativo che consente una migliore comprensione dei fattori determinanti che influenzano la tossicità.

I dati mostrano che più variabili hanno influenzato significativamente l’esito dei test di tossicità quando le colture primarie sono state esposte alle diverse nanoparticelle. I test di tossicità eseguiti in RTgill-W1 sono stati influenzati solo dal tempo di esposizione e dalla concentrazione di nanoparticelle. L’intero set di dati è stato integrato in un indice di risposta biologica per mostrare l’impatto complessivo dell’esposizione alle nanoparticelle.