Primo rapporto di isolamento riuscito di una variante simile all’HPR0 del virus dell’anemia infettiva del salmone (ISAV) mediante coltura cellulare

Le alterazioni circadiane aumentano con la progressione in un modello di coltura cellulare derivato dal paziente del cancro al seno

L’interruzione del ritmo circadiano può provocare lo sviluppo di varie malattie, incluso il cancro al seno. Sebbene gli studi abbiano utilizzato linee cellulari per studiare le correlazioni tra ritmi circadiani alterati e cancro, questi modelli hanno background genetici diversi e non rispecchiano i cambiamenti che si verificano con lo sviluppo della malattia. I modelli cellulari isogenici possono ricapitolare i cambiamenti durante la progressione del cancro.

Quindi, in questo studio, un modello di cancro al seno derivato dalla paziente, la serie 21T, è stato utilizzato per valutare i cambiamenti delle oscillazioni circadiane della trascrizione della proteina dell’orologio centrale mentre le cellule passano da uno stato normale a uno stato maligno. Sono state utilizzate tre linee cellulari: H16N2 (epitelio mammario normale), 21PT (iperplasia duttale atipica) e 21MT-1 (carcinoma metastatico invasivo). Le cellule cancerose sono entrambe HER2+. Abbiamo valutato i profili trascrizionali di due proteine core clock, BMAL1 e PER2, che rappresentano un componente positivo e negativo dell’oscillatore molecolare. Nelle normali cellule H16N2, entrambi i geni possedevano oscillazioni ritmiche dell’mRNA con periodi e fasi vicini allo standard.

Tuttavia, nelle cellule cancerose sono stati osservati cambiamenti consistenti: entrambi i geni avevano periodi che deviavano più lontano dal normale e non avevano una relazione antifase. In futuro, dovrebbero essere intrapresi studi meccanicistici per determinare i cambiamenti oncogeni responsabili delle alterazioni circadiane riscontrate.

Esperienza incrementale in coltura primaria in vitro di cellule endoteliali arteriose polmonari umane raccolte da Si-Ganz cateteri arteriosi polmonari

L’ipertensione arteriosa polmonare (PAH) è una condizione devastante che colpisce la parete microvascolare polmonare e l’endotelio, con conseguente ostruzione parziale o totale. Nonostante una combinazione di costose terapie vasodilatatrici, la mortalità rimane elevata. Approcci terapeutici personalizzati, basati sull’accesso al materiale del paziente per svelare le specificità del paziente, potrebbero far progredire il campo. Recentemente è stata descritta una tecnica innovativa che prevede la raccolta di cellule endoteliali dell’arteria polmonare (PAEC) al momento della diagnosi. Lo scopo del presente studio era di mettere a punto la tecnica iniziale e di fenotipizzare l’evoluzione delle sottocolture in vitro di PAEC.

I PAEC sono stati prelevati da cateteri arteriosi polmonari di Swan-Ganz durante la diagnostica di routine o il cateterismo di follow-up del cuore destro. I PAEC raccolti sono stati fenotipizzati mediante citometria a flusso e immunofluorescenza concentrandosi su marcatori endoteliali specifici. Evidenziamo la capacità di raccogliere i PAEC dei pazienti e di mantenerli fino a 7-12 sottocolture.

Tracciando il fenotipo endoteliale, abbiamo osservato che i PAEC potrebbero mantenere un fenotipo endoteliale per diverse settimane in coltura. Il presente studio evidenzia l’opportunità unica di ottenere subcolture omogenee di PAEC primari dai pazienti alla diagnosi e al follow-up. Inoltre, apre prospettive promettenti per quanto riguarda la medicina di precisione su misura per i pazienti affetti da malattie vascolari polmonari rare.

Gli effetti dell’irradiazione di luce viola e blu sui patogeni ESKAPE e sulle cellule umane in presenza di terreni di coltura cellulareI

batteri appartenenti al gruppo dei patogeni ESKAPE sono responsabili della maggior parte delle infezioni nosocomiali. A causa dell’aumento della resistenza agli antibiotici, le strategie terapeutiche alternative sono di grande rilevanza clinica. In questo contesto la luce visibile come tecnica di disinfezione rappresenta un’opzione interessante in quanto i patogeni microbici possono essere inattivati senza adiuvanti. Tuttavia sono stati riportati anche effetti citotossici della luce visibile sulle cellule ospiti. Abbiamo confrontato la citotossicità dell’irradiazione di luce viola e blu sulle cellule monocitiche THP-1 e dell’epitelio alveolare A549 con l’effetto di inattivazione sui patogeni ESKAPE.

Le cellule THP-1 hanno mostrato una maggiore suscettibilità all’irradiazione rispetto alle cellule A549 con i primi effetti citotossici che si sono verificati a 300 J cm ^-2 (405 nm) e 400 J cm ^-2 (450 nm) rispetto a 300 J cm ^-2 e 1000 J cm ^-2 , rispettivamente. Potremmo definire condizioni in cui una riduzione significativa delle unità formanti colonie per tutti i patogeni ESKAPE, ad eccezione di Enterococcus faecium, è stata ottenuta a 405 nm evitando la citotossicità. L’irradiazione a 450 nm ha dimostrato un effetto più variabile che dipendeva dalla specie e dal mezzo. In sintesi, si potrebbe ottenere una riduzione significativa dei batteri vitali a dosi di irradiazione subtossiche, supportando un potenziale uso della luce visibile come agente antimicrobico in contesti clinici.

Coltura primaria e identificazione di cellule endoteliali microvascolari glomerulari di ratto

Lo scopo del presente studio era stabilire un metodo semplice ed efficiente per l’isolamento e la coltura di cellule endoteliali microvascolari glomerulari primarie di ratto in vitro. I reni bilaterali sono stati prelevati da ratti Sprague-Dawley di 7-10 giorni e la corteccia renale è stata separata. I glomeruli sono stati ottenuti tagliando e passando continuamente setacci da 200 e 300 maglie. Dopo la digestione con collagenasi di tipo IV per 15-20 minuti, i globuli microvascolari renali sono stati raccolti per l’inoculazione e la coltura. Le cellule in coltura sono state identificate mediante osservazione della morfologia cellulare e colorazione immunocitochimica con antigene correlato al fattore VIII.

I risultati hanno mostrato che i globuli microvascolari renali erano irregolarmente sferici, senza cisti, e la struttura dell’ansa capillare era chiara; dopo 3 giorni di coltura primaria, brevi cellule fusiformi strisciavano attorno ai globuli microvascolari renali e formavano gradualmente colonie cellulari, mostrando una distribuzione a “forma a isola”; 4-5 giorni dopo, le colonie cellulari si fusero tra loro; 6 giorni dopo, le celle coprivano il fondo del piatto, mostrando una tipica disposizione a mosaico monostrato, simile a una pietra per lastricati.

La colorazione immunocitochimica dell’antigene correlato al fattore VIII ha mostrato che il citoplasma era leggermente colorato di rosso brunastro e il tasso di cellule positive all’antigene correlato al fattore VIII era quasi del 100%. I risultati di cui sopra suggeriscono che questo studio ha stabilito con successo un metodo che combina lo screening continuo e la digestione con collagenasi per la coltura di cellule endoteliali microvascolari glomerulari primarie di ratto in vitro. Fornisce un importante strumento cellulare per studiare il meccanismo dell’insorgenza e dello sviluppo della nefropatia diabetica.