Luglio 4, 2022

Primo rapporto di isolamento riuscito di una variante simile all’HPR0 del virus dell’anemia infettiva del salmone (ISAV) mediante coltura cellulare

ISAV è l’agente eziologico dell’anemia infettiva del salmone (ISA), una malattia elencata dall’OIE che ha causato importanti perdite economiche all’industria del salmone atlantico (Salmo salar). Le varianti ISAV sono identificate come patogene o non patogene in base alla presenza o assenza di una delezione nella regione altamente polimorfica (HPR) del segmento 6 (S6). Le varianti HPRΔ (patogene) sono le uniche forme del virus note per crescere in coltura cellulare. Questa è la prima segnalazione di una variante HPR0 isolata in coltura cellulare.
L’isolato è, tuttavia, atipico in quanto mostra un marker di varianti virulente su un altro segmento (S5), che non è mai stato riportato per nessun’altra variante HPR0. Il significato di questa scoperta rimane poco chiaro fino a quando non viene svolto un lavoro più approfondito, ma mette in discussione le conoscenze attuali.
Parole chiave: Salmo salar; CHIEDI; HPR0; ISAV; SHK-1; isolamento del virus.

Le alterazioni circadiane aumentano con la progressione in un modello di coltura cellulare derivato dal paziente del cancro al seno

 

L’interruzione del ritmo circadiano può provocare lo sviluppo di varie malattie, incluso il cancro al seno. Sebbene gli studi abbiano utilizzato linee cellulari per studiare le correlazioni tra ritmi circadiani alterati e cancro, questi modelli hanno background genetici diversi e non rispecchiano i cambiamenti che si verificano con lo sviluppo della malattia. I modelli cellulari isogenici possono ricapitolare i cambiamenti durante la progressione del cancro.

Quindi, in questo studio, un modello di cancro al seno derivato dalla paziente, la serie 21T, è stato utilizzato per valutare i cambiamenti delle oscillazioni circadiane della trascrizione della proteina dell’orologio centrale mentre le cellule passano da uno stato normale a uno stato maligno. Sono state utilizzate tre linee cellulari: H16N2 (epitelio mammario normale), 21PT (iperplasia duttale atipica) e 21MT-1 (carcinoma metastatico invasivo). Le cellule cancerose sono entrambe HER2+. Abbiamo valutato i profili trascrizionali di due proteine core clock, BMAL1 e PER2, che rappresentano un componente positivo e negativo dell’oscillatore molecolare. Nelle normali cellule H16N2, entrambi i geni possedevano oscillazioni ritmiche dell’mRNA con periodi e fasi vicini allo standard.

Tuttavia, nelle cellule cancerose sono stati osservati cambiamenti consistenti: entrambi i geni avevano periodi che deviavano più lontano dal normale e non avevano una relazione antifase. In futuro, dovrebbero essere intrapresi studi meccanicistici per determinare i cambiamenti oncogeni responsabili delle alterazioni circadiane riscontrate.

Esperienza incrementale in coltura primaria in vitro di cellule endoteliali arteriose polmonari umane raccolte da Si-Ganz cateteri arteriosi polmonari

L’ipertensione arteriosa polmonare (PAH) è una condizione devastante che colpisce la parete microvascolare polmonare e l’endotelio, con conseguente ostruzione parziale o totale. Nonostante una combinazione di costose terapie vasodilatatrici, la mortalità rimane elevata. Approcci terapeutici personalizzati, basati sull’accesso al materiale del paziente per svelare le specificità del paziente, potrebbero far progredire il campo. Recentemente è stata descritta una tecnica innovativa che prevede la raccolta di cellule endoteliali dell’arteria polmonare (PAEC) al momento della diagnosi. Lo scopo del presente studio era di mettere a punto la tecnica iniziale e di fenotipizzare l’evoluzione delle sottocolture in vitro di PAEC.

I PAEC sono stati prelevati da cateteri arteriosi polmonari di Swan-Ganz durante la diagnostica di routine o il cateterismo di follow-up del cuore destro. I PAEC raccolti sono stati fenotipizzati mediante citometria a flusso e immunofluorescenza concentrandosi su marcatori endoteliali specifici. Evidenziamo la capacità di raccogliere i PAEC dei pazienti e di mantenerli fino a 7-12 sottocolture.

Tracciando il fenotipo endoteliale, abbiamo osservato che i PAEC potrebbero mantenere un fenotipo endoteliale per diverse settimane in coltura. Il presente studio evidenzia l’opportunità unica di ottenere subcolture omogenee di PAEC primari dai pazienti alla diagnosi e al follow-up. Inoltre, apre prospettive promettenti per quanto riguarda la medicina di precisione su misura per i pazienti affetti da malattie vascolari polmonari rare.

Gli effetti dell’irradiazione di luce viola e blu sui patogeni ESKAPE e sulle cellule umane in presenza di terreni di coltura cellulareI

batteri appartenenti al gruppo dei patogeni ESKAPE sono responsabili della maggior parte delle infezioni nosocomiali. A causa dell’aumento della resistenza agli antibiotici, le strategie terapeutiche alternative sono di grande rilevanza clinica. In questo contesto la luce visibile come tecnica di disinfezione rappresenta un’opzione interessante in quanto i patogeni microbici possono essere inattivati senza adiuvanti. Tuttavia sono stati riportati anche effetti citotossici della luce visibile sulle cellule ospiti. Abbiamo confrontato la citotossicità dell’irradiazione di luce viola e blu sulle cellule monocitiche THP-1 e dell’epitelio alveolare A549 con l’effetto di inattivazione sui patogeni ESKAPE.

Le cellule THP-1 hanno mostrato una maggiore suscettibilità all’irradiazione rispetto alle cellule A549 con i primi effetti citotossici che si sono verificati a 300 J cm -2 (405 nm) e 400 J cm -2 (450 nm) rispetto a 300 J cm -2 e 1000 J cm -2 , rispettivamente. Potremmo definire condizioni in cui una riduzione significativa delle unità formanti colonie per tutti i patogeni ESKAPE, ad eccezione di Enterococcus faecium, è stata ottenuta a 405 nm evitando la citotossicità. L’irradiazione a 450 nm ha dimostrato un effetto più variabile che dipendeva dalla specie e dal mezzo. In sintesi, si potrebbe ottenere una riduzione significativa dei batteri vitali a dosi di irradiazione subtossiche, supportando un potenziale uso della luce visibile come agente antimicrobico in contesti clinici.

Coltura primaria e identificazione di cellule endoteliali microvascolari glomerulari di ratto

Lo scopo del presente studio era stabilire un metodo semplice ed efficiente per l’isolamento e la coltura di cellule endoteliali microvascolari glomerulari primarie di ratto in vitro. I reni bilaterali sono stati prelevati da ratti Sprague-Dawley di 7-10 giorni e la corteccia renale è stata separata. I glomeruli sono stati ottenuti tagliando e passando continuamente setacci da 200 e 300 maglie. Dopo la digestione con collagenasi di tipo IV per 15-20 minuti, i globuli microvascolari renali sono stati raccolti per l’inoculazione e la coltura. Le cellule in coltura sono state identificate mediante osservazione della morfologia cellulare e colorazione immunocitochimica con antigene correlato al fattore VIII.

I risultati hanno mostrato che i globuli microvascolari renali erano irregolarmente sferici, senza cisti, e la struttura dell’ansa capillare era chiara; dopo 3 giorni di coltura primaria, brevi cellule fusiformi strisciavano attorno ai globuli microvascolari renali e formavano gradualmente colonie cellulari, mostrando una distribuzione a “forma a isola”; 4-5 giorni dopo, le colonie cellulari si fusero tra loro; 6 giorni dopo, le celle coprivano il fondo del piatto, mostrando una tipica disposizione a mosaico monostrato, simile a una pietra per lastricati.

La colorazione immunocitochimica dell’antigene correlato al fattore VIII ha mostrato che il citoplasma era leggermente colorato di rosso brunastro e il tasso di cellule positive all’antigene correlato al fattore VIII era quasi del 100%. I risultati di cui sopra suggeriscono che questo studio ha stabilito con successo un metodo che combina lo screening continuo e la digestione con collagenasi per la coltura di cellule endoteliali microvascolari glomerulari primarie di ratto in vitro. Fornisce un importante strumento cellulare per studiare il meccanismo dell’insorgenza e dello sviluppo della nefropatia diabetica.

 

Human Serum Albumin (HSA), Cell Culture Tested, Recombinant from plant

CA069-010 GenDepot 10g 968 EUR

Poly-D-Lysine Solution in PBS, 0.01%, Cell culture tested

CA084-010 GenDepot 100ml 138 EUR

CytoSelect 24-Well Cell Co-Culture System

CBA-160 Cell Biolabs 24 assays 438 EUR

CytoSelect 24-Well Cell Co-Culture System

CBA-160-5 Cell Biolabs 5 x 24 assays 1732 EUR

Baby Rabbit Complement serum, Cell culture grade (Lyophilized), tested for complement activity

COMPBR-1 Alpha Diagnostics 1 ml 164 EUR

Baby Rabbit Complement serum, Cell culture grade (Lyophilized), tested for complement activity

COMPBR-C-10 Alpha Diagnostics 10 ml 651 EUR

Agar, Plant Tissue Culture Tested , Type I , Derived from Gracilaria.

A2008-050 GenDepot 500g 205 EUR

Agar, Plant Tissue Culture Tested , Type I , Derived from Gracilaria.

A2008-100 GenDepot 1Kg 309 EUR

Agar, Plant Tissue Culture Tested , Type I , Derived from Gracilaria.

A2008-500 GenDepot 5Kg 1157 EUR

Agar, Plant Tissue Culture Tested , Type II, Dervied from Gelidium

A2009-050 GenDepot 500g 212 EUR

Agar, Plant Tissue Culture Tested , Type II, Dervied from Gelidium

A2009-500 GenDepot 5Kg 1225 EUR

100 ML, CELL CULTURE GRADE WATER; TESTED TO USP STERILE WATER FOR INJECTION SPECIFICATIONS

25-055-CI CORNING 100 mL/pk 58 EUR

1 L, CELL CULTURE GRADE WATER; TESTED TO USP STERILE WATER FOR INJECTION SPECIFICATIONS

25-055-CM CORNING 1 L/pk 72 EUR

500 ML, CELL CULTURE GRADE WATER; TESTED TO USP STERILE WATER FOR INJECTION SPECIFICATIONS

25-055-CV CORNING 500 mL/pk 59 EUR

20 L, CELL CULTURE GRADE WATER; TESTED TO USP STERILE WATER FOR INJECTION SPECIFICATIONS

25-055-LB CORNING 20 L/pk 210 EUR

100 L, CELL CULTURE GRADE WATER; TESTED TO USP STERILE WATER FOR INJECTION SPECIFICATIONS

25-055-LG CORNING 100 L/pk 792 EUR

200 L,CELL CULTURE GRADE WATER; TESTED TO USP STERILE WATER FOR INJECTION SPECIFICATIONS

25-055-LH CORNING 200 L/pk 1159 EUR

ExoStep Cell Culture

ExoS-25-C9 ImmunoStep 25 test 550.5 EUR

Supreme Plant Tissue Culture Grade Agar

PCTA100 Plant Cell Technologies 500g 120 EUR

Supreme Plant Tissue Culture Grade Agar

PCTA500 Plant Cell Technologies 1000g 150 EUR

Water, Cell Culture Grade

CA018-600 GenDepot 6x1000ml 124 EUR

Hepes Cell Culture Grade

AK3268-0250 Akron Biotech 250g Ask for price

Hepes Cell Culture Grade

AK3268-0500 Akron Biotech 500g Ask for price

Hepes Cell Culture Grade

AK3268-1000 Akron Biotech 1kg Ask for price

Water, 0.1um Filtered, cell cultures tested

W0900-050 GenDepot 500 ml 68 EUR

Water, 0.1um Filtered, cell cultures tested

W0900-310 GenDepot 10x500 ml 169 EUR

Water, 0.1um Filtered, cell cultures tested

W0900-350 GenDepot 50x500 ml 523 EUR

500 ML, CELL CULTURE GRADE WATER , WITH SEPTUM CAP; TESTED TO USP STERILE WATER FOR INJECTION SPECIFICATIONS

25-055-CVC CORNING 500 mL/pk 65 EUR

 

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