Giugno 17, 2024

LEDitSHAKE: a lighting system to optimize the secondary metabolite content of plant cell suspension cultures

Plant secondary metabolites are widely used in the food, cosmetic and pharmaceutical industries. They can be extracted from sterile grown plant cell suspension cultures, but yields and quality strongly depend on the cultivation environment, including optimal illumination. Current shaking incubators do not allow different light wavelengths, intensities and photoperiods to be tested in parallel.

We therefore developed LEDitSHAKE, a system for multiplexed customized illumination within a single shaking incubator. We used 3D printing to integrate light-emitting diode assemblies into flask housings, allowing 12 different lighting conditions (spectrum, intensity and photoperiod) to be tested simultaneously.

We did a proof of principle of LEDitSHAKE using the system to optimize anthocyanin production in grapevine cell suspension cultures. The effect of 24 different light compositions on the total anthocyanin content of grapevine cell suspension cultures was determined using a Design of Experiments approach. We predicted the optimal lighting conditions for the upregulation and downregulation of 30 anthocyanins and found that short-wavelength light (blue, UV) maximized the concentration of most anthocyanins, whereas long-wavelength light (red) had the opposite effect. Therefore our results demonstrate proof of principle that the LEDitSHAKE system is suitable for the optimization of processes based on plant cell suspension cultures.

Modello di coltura cellulare derivata da tumore per lo studio della biologia del meningioma

Il meningioma è il tumore primario del sistema nervoso centrale più comune. Sebbene per lo più non maligno, il meningioma può causare gravi complicazioni per effetto massa ed edema vasogenico. Sebbene la chirurgia e le radiazioni migliorino i risultati, non tutti i casi possono essere trattati a causa della posizione eloquente. Attualmente non è disponibile alcun trattamento medico per rallentare la crescita del meningioma a causa della comprensione incompleta della patologia sottostante, che a sua volta è dovuta alla mancanza di colture di tessuti ad alta fedeltà e di modelli animali.

\Proponiamo un metodo semplice e rapido per l’instaurazione di colture primarie di meningioma tumorale. Queste cellule possono essere mantenute in coltura per un tempo limitato in terreni privi di siero come sfere e formare colture aderenti in presenza di siero fetale di vitello al 4%. Molti dei campioni di tessuto mostrano l’espressione del marcatore di lignaggio PDG2S, che è tipicamente trattenuto in cellule coltivate abbinate, suggerendo la presenza di cellule di origine aracnoide.

Inoltre, nelle colture sono presenti anche cellule non aracnoidi, comprese le cellule endoteliali vascolari, oltre alle cellule aracnoidi, fornendo potenzialmente un microambiente delle cellule tumorali più accurato e rendendo così il modello più rilevante per la ricerca sul meningioma e lo screening di farmaci ad alto rendimento.

Sistema microfluidico organ-on-chip per il monitoraggio multi-analita dei metaboliti in colture cellulari 3D

Le colture cellulari tridimensionali che utilizzano cellule staminali derivate dal paziente sono modelli in vitro essenziali per una terapia del cancro più efficiente e personalizzata. Attualmente, le condizioni di coltura e le concentrazioni di metaboliti, in particolare l’ipossia, spesso non sono accessibili in modo continuo e in situ all’interno dei sistemi microfisiologici. Tuttavia, la comprensione e la standardizzazione del microambiente cellulare sono la chiave per modelli in vitro di successo. Abbiamo sviluppato una piattaforma microfluidica organo su chip per colture 3D eterogenee basate su matrice con chemio e biosensori elettrochimici completamente integrati per i metaboliti energetici ossigeno, lattato e glucosio. Le microstrutture avanzate consentono l’integrazione diretta della matrice cellulare con le apparecchiature di laboratorio standard, la compartimentazione e l’accesso al microfluidico.

Le cellule staminali del carcinoma mammario singole, derivate dal paziente, triplo-negative si sviluppano in organoidi tumorali in una coltura sferoide eterogenea su chip. Il nostro sistema consente un controllo senza precedenti delle condizioni di coltura, inclusa l’ipossia, e la verifica simultanea mediante sensori integrati. Oltre ai lavori precedenti, i nostri risultati dimostrano un monitoraggio del metabolita multi-analita su chip preciso e riproducibile in condizioni dinamiche da una coltura basata su matrice per più di una settimana.

Le risposte alle alterazioni delle condizioni della coltura e dell’esposizione ai farmaci antitumorali, come il consumo di metaboliti e i tassi di produzione, potrebbero essere ottenute quantitativamente e in tempo reale, contrariamente alle analisi degli endpoint. Il nostro approccio evidenzia l’importanza del monitoraggio continuo dei metaboliti in situ nelle colture cellulari 3D per quanto riguarda la standardizzazione e il controllo delle condizioni di coltura e lo screening dei farmaci nella ricerca sul cancro. Nel complesso, i risultati sottolineano il potenziale dei microsensori nei sistemi organ-on-chip per un’applicazione di successo, ad esempio nella medicina personalizzata.

Un metodo semplice per quantificare il tasso di lipogenesi de novo e la selezione del substrato nelle colture cellulari mediante l’analisi 13 C NMR degli isotopomeri della frazione lipidica grezza

Scopo: La lipogenesi de novo (DNL) è fondamentale per la crescita e il mantenimento delle cellule e i precursori dell’acetil-CoA possono essere derivati da diversi substrati. Abbiamo sviluppato un’analisi 13 C NMR di estratti lipidici da cellule di microglia in coltura somministrate con glucosio [U- 13 C] che informa l’attività lipogenica complessiva e il contributo del glucosio al acetil-CoA lipogenico.
Metodi: la linea cellulare microgliale BV-2 coltivata con glucosio e glutammina è stata fornita con [U- 13 C] glucosio e glutammina non marcata per 24 h e studiato sia in presenza che in assenza di lipopolisaccaride (LPS). Le cellule sono state quindi estratte per i lipidi e la frazione lipidica grezza è stata analizzata mediante  C NMR. Segnali dell’isotopomero C nell’acido grasso ω – 1 e ω – 2 segnali che rappresentano l’arricchimento consecutivo o non consecutivo della catena degli acidi grassi di [1,2- 13 ] acetil-CoA sono stati quantificati e applicati a un modello probabilistico di precursore di acetil-CoA e arricchimento di acidi grassi.
Risultati: il glucosio ha contribuito per il 72 ± 2% dell’acetil-CoA lipogenico mentre il DNL da tutte le fonti ha rappresentato il 16 ± 2% del turnover lipidico. Con LPS, c’è stata una diminuzione significativa del contributo di glucosio (59 ± 4%, p & lt; 0,05) mentre DNL è rimasto invariato (11 ± 3%).
Conclusioni: Una semplice analisi 13 C NMR delle frazioni lipidiche grezze delle cellule BV-2 somministrate con [U- 13 C] il glucosio informa l’attività del DNL e il contributo del glucosio ai precursori dell’acetil-CoA. Mentre il DNL è stato preservato in presenza di LPS, c’è stato il reindirizzamento delle fonti di acetil-CoA lipogenico dal glucosio ad altri substrati.
Pertanto, nel presente articolo, descriviamo un nuovo e semplice approccio di analisi 13 C NMR per rivelare l’attività lipogenica complessiva e il contributo del substrato al DNL, adatto per valutare i tassi di DNL nelle colture cellulari.

Exosome Purification and Detection Kit (Cell Culture)

abx290025-25tests Abbexa 25 tests 777.6 EUR

Human B Cell Culture and Expansion Kit

BC1001-1 ApexBio 1 package 5200 EUR

ExoStep Culture

ExoS-25-C9 ImmunoStep 25 test 423.5 EUR

Greiner culture flasks tissue culture treated - PK200

C6231-200EA Scientific Laboratory Supplies PK200 260.55 EUR

Murashige and Skoog (MS) Modified Medium, Arabidopsis Culture Medium

30630143-2 Glycomatrix 25 L 36.21 EUR

Murashige and Skoog (MS) Modified Medium, Arabidopsis Culture Medium

30630143-3 Glycomatrix 50 L 68.8 EUR

Cell Culture Grade Water, Cell Culture Tested, Sterile

CCM1081-500 Bio Basic 500 mL 73.49 EUR

Cell Culture Grade Water, Cell Culture Tested, Sterile

CCM2081-1000 Bio Basic 1000 mL 82.64 EUR

CLOSURE, CULTURE TUBE

C935 PhytoTechnology Laboratories 500EA 45.01 EUR

ExoStepTM Culture + Standard

ExoS-25-CST9 ImmunoStep 25 test 871.2 EUR

ExoStep Culture + Standard

ExoS-50-CST9 ImmunoStep 50 951.5 EUR

Stock Culture Agar

M182-500G EWC Diagnostics 1 unit 44.15 EUR

Algae Culture Broth

M342-100G EWC Diagnostics 1 unit 14.77 EUR

Algae Culture Broth

M342-500G EWC Diagnostics 1 unit 42.8 EUR

Algae Culture Agar

M343-500G EWC Diagnostics 1 unit 45.2 EUR

Pantothenate Culture Agar

M135-100G EWC Diagnostics 1 unit 15.93 EUR

TRAY, CULTURE VESSEL

T8077 PhytoTechnology Laboratories 1EA 133.43 EUR

35 mm culture dish and slide adaptor for XY stage - EACH

COU2056 Scientific Laboratory Supplies EACH 133.66 EUR

60 mm culture dish and slide adaptor for XY stage - EACH

COU2058 Scientific Laboratory Supplies EACH 133.66 EUR

ExoQuick Exosome Isolation and RNA Purification kit (for Tissue Culture Media)

EQ806TC-1 SBI 10 preps 493 EUR

ExoELISA-Step for detection and quantification of exosomes from cell culture

Exo2506 ImmunoStep 96 654.5 EUR

Recombinant (Yeast) Human Insulin (USP grade) for cell culture and ELISA

INSL16-N-5 Alpha Diagnostics 5 mg 343.2 EUR

HS27 CELLS TUBE CULTURE

87-0600 Quidel each Ask for price

CRFK CELL TUBE CULTURE

63-0600 Quidel each Ask for price

5.0ml Culture Tubes, 12x75mm

21-125 Genesee Scientific 8 Bags of 125 Tubes/Unit 97.37 EUR

5.0ml Culture Tubes, 12x75mm

21-126 Genesee Scientific 8 Bags of 125 Tubes/Unit 105 EUR

5.0ml Culture Tubes, 12x75mm

21-127 Genesee Scientific 20 Bags of 25 Tubes/Unit 62.04 EUR

5.0ml Culture Tubes, 12x75mm

21-128 Genesee Scientific 20 Bags of 25 Tubes/Unit 57.82 EUR

16.0ml Culture Tubes, 17x100mm

21-129 Genesee Scientific 20 Bags of 25 Tubes/Unit 80.83 EUR

16.0ml Culture Tubes, 17x100mm

21-130 Genesee Scientific 20 Bags of 25 Tubes/Unit 61.69 EUR

 

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